根癌农杆菌对云南红豆杉原生质体的转化

编号 zgly0000305495

文献类型 期刊论文

文献题名 根癌农杆菌对云南红豆杉原生质体的转化

学科分类 220.1520;林木遗传学

作者 罗建平  姜绍通  潘丽军 

作者单位 合肥工业大学生物与食品工程学院合肥 

母体文献 世界科学技术：中医药现代化 

年卷期 2003,5(3)

页码 49-52

年份 2003 

分类号 Q943.2  R284.2 

关键词 根癌农杆菌  云南红豆杉  原生质体  紫杉醇  提取  植物药  克隆转化 

文摘内容 本文介绍了根癌农杆菌T—DNA对云南红豆杉原生质体的转化，分析了转化系的紫杉醇合成能力。实验以生长20d的云南红豆杉幼茎诱导的淡黄色愈伤组织为材料，经酶解可分离出大量有活力的原生质体。在由B5无机盐、KM有机成分、3．0mg／L2，4-D、0．1mg／LKT和0．45mol／L果糖组成的培养基中培养1周后，原生质体再生细胞持续分裂形成细胞团。根癌农杆菌对原生质体的转化能力与原生质体生长状态及菌株相关。虽然刚分离的或已再生细胞壁的原生质体不能被根癌农杆菌转化，但由10个以上细胞组成的原生质体克隆和根癌农杆菌B6S3菌株共培养后可实现T—DNA转化，高压纸电泳检测转化系具有冠瘿碱的合成，转化率约为5％。HPLC证实转化系具有合成紫杉醇的能力，但不同转化系中紫杉醇含量变异很大，最高含量为0．076％，是对照愈伤组织的6倍，表明T—DNA的插入改变了培养细胞对紫杉醇的合成。获得的高产转化系细胞生长比对照低，但继代培养中其生长和紫杉醇积累基本保持稳定。尽管转化系合成紫杉醇能力远未达到商业化生产的要求，但研究通过T—DNA对原生质体的转化而实现插入诱变，可以为分离高产紫杉醇优良细胞系提供单细胞筛选系统。