一种基于重组截短Gcaa407～614蛋白的赤羽病病毒抗体间接ELISA方法的建立

编号 zgly0001669659

文献类型 期刊论文

文献题名 一种基于重组截短Gcaa407～614蛋白的赤羽病病毒抗体间接ELISA方法的建立

作者 王建华  赵丹  陈本龙  张俊哲  王玉玲  肖妍 

作者单位 天津海关 

母体文献 中国动物检疫 

年卷期 2019年05期

年份 2019 

分类号 S852.65 

关键词 赤羽病病毒  截短Gcaa407614蛋白  原核表达  间接ELISA  抗体检测 

文摘内容 为建立一种检测赤羽病病毒（Akabane virus,AKAV）抗体的ELISA方法,对Gc蛋白从407位至614位氨基酸的编码序列,经密码子优化后进行基因合成,然后克隆至重组表达载体PET-32a（+）,转化大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞,用1 mmol/L IPTG在37℃进行诱导表达。用Ni+2-NTA树脂亲和层析方法纯化重组蛋白(trGcaa407614),以Western blotting检测其抗原性;用纯化trGcaa407614建立间接ELISA方法(trGcaa407614-ELISA),并评价该方法的特异性、敏感性和重复性。结果显示:重组蛋白trGcaa407614以包涵体形式在大肠杆菌中高效表达,经Ni+2-NTA树脂亲和层析纯化后的浓度2.4 mg/mL,纯度为94%,对山羊抗AKAV阳性血清呈现较好的抗原反应性;所建立的trGcaa407614-ELISA方法的最佳抗原包被浓度为4.0μg/mL,血清稀释度为1:80,血清阴阳性的OD450临界值为0.318;该方法对AKAV阳性血清呈特异性反应,组内试验和组间试验的变异系数均小于10%。用该方法对273份进口牛血清进行AKAV抗体检测,发现10份血清为阳性。总之,本研究建立的trGcaa407614-ELISA方法为血清样品中赤羽病病毒抗体的检测提供了有效手段。