甘蔗黄叶病毒外壳蛋白基因克隆及其实时荧光RT-PCR检测

编号 zgly0001398320

文献类型 期刊论文

文献题名 甘蔗黄叶病毒外壳蛋白基因克隆及其实时荧光RT-PCR检测

作者 高三基  杨帆  陈平华  王恒波  徐景升  陈如凯 

作者单位 福建农林大学农业部甘蔗遗传改良重点开放实验室 

母体文献 植物病理学报 

年卷期 2011年03期

年份 2011 

分类号 S432.41 

关键词 甘蔗黄叶病毒  外壳蛋白  序列分析  实时荧光RT-PCR 

文摘内容 甘蔗黄叶病毒(Sugarcane yellow leaf virus,SCYLV)引起的甘蔗黄叶病是一种新的全球性病毒病害。本文以YLSCPF1和YLSCPR591为引物,采用RT-PCR方法克隆了甘蔗黄叶病毒福建分离物(CHN-FJ1)外壳蛋白(CP)基因,编码196个氨基酸。分析不同地理来源的SCYLV病毒分离物cp基因核苷酸及其推导编码的氨基酸序列,同源性达95%以上。根据cp基因的保守序列,设计1对特异性引物和TaqMan探针,建立了SCYLV的TaqMan实时荧光RT-PCR方法。结果表明,检测下限为初始质粒模板DNA 1 000拷贝/μL(约3.61 fg/μL),比常规PCR方法的灵敏度提高100倍。检测甘蔗花叶病毒、宿根矮化病菌和黑穗病菌,没有典型的扩增曲线和无Ct值。应用实时荧光RT-PCR、常规RT-PCR和组织印迹免疫杂交(TBIA)对田间甘蔗叶片样品进行检测,阳性检出率分别为100%、61.5%和69.2%,表明该方法比常规RT-PCR和TBIA具有更高的灵敏度,适合于对SCYLV的检测。