固始鸡白细胞介素2基因的克隆、表达及其表达蛋白活性的检测

编号 zgly0001317280

文献类型 期刊论文

文献题名 固始鸡白细胞介素2基因的克隆、表达及其表达蛋白活性的检测

作者 王彦彬  卢中华  康相涛  宋素芳  孙桂荣  韩瑞丽  李国喜  李守义 

作者单位 河南农业大学牧医工程学院河南农业生物工程技术重点实验室  郑州牧业工程高等专科学校  河南农业大学牧医工程学院河南农业生物工程技术重点实验室 河南郑州450002  河南郑州450002  河南郑州450011 

母体文献 西北农林科技大学学报(自然科学版 

年卷期 2006年05期

年份 2006 

分类号 S852.4 

关键词 固始鸡  白细胞介素2  原核表达  生物活性 

文摘内容 参照GenBank上已发表的鸡白细胞介素2序列设计引物,运用RT-PCR技术,从经ConA诱导的 20～35日龄固始鸡脾细胞总RNA中扩增出目的片段,IL-2基因,将其插入到pGEM-T载体上,构建了克隆质粒 pGEM-T-chIL-2。测序结果表明,本试验克隆的固始鸡白细胞介素2基因与GenBank上已发表的序列相比,存在2 个核苷酸变异。重新设计表达引物,以克隆质粒pGEM-T—chIL一2为模板PCR扩增表达片段,对表达片段进行 Hind Ⅲ和BamH Ⅰ双酶切,连接到作同样双酶切的pET28a表达载体上,鉴定后转化大肠杆菌BL21并进行IPTG 诱导表达,然后对表达产物进行SDS-PAGE电泳鉴定,结果表明,表达蛋白主要以包涵体的形式存在,表达蛋白分子质量约为18 ku;目的蛋白表达量占总量的18％。体外活性检测表明,重组蛋白具有促进淋巴细胞增殖的活性。