家蚕羧酸酯酶基因Bmae35的克隆、序列分析及表达

编号 zgly0001410076

文献类型 期刊论文

文献题名 家蚕羧酸酯酶基因Bmae35的克隆、序列分析及表达

作者 杨微  齐登伟  余泉友  张泽 

作者单位 重庆大学农学及生命科学研究院  西南大学农业部蚕桑学重点开放实验室 

母体文献 昆虫学报 

年卷期 2011年06期

年份 2011 

分类号 S881.26 

关键词 家蚕  羧酸酯酶  基因克隆  表达模式  原核表达  蛋白免疫印迹 

文摘内容 昆虫羧酸酯酶是一类能对外源化合物解毒和气味分子降解的重要酶系。本研究选取在家蚕Bombyx mori幼虫嗅觉感器中有表达,并与蛀茎夜蛾Sesamia nonagrioides触角酯酶基因Snon-EST可能为直系同源基因的Bmae35进行克隆和外源表达研究。结果表明:该基因编码区长1581bp,共编码526个氨基酸。与其他昆虫触角酯酶的多序列比对分析发现,Bmae35编码的蛋白具有酯酶活性必须的催化残基Ser191,Glu313和His429,也保持着α-酯酶家族特征基序Gly-x-Ser-x-Gly。RT-PCR分析显示,Bmae35在家蚕5龄第3天各组织中均有表达,其中在头、脂肪体、马氏管、体壁和丝腺中的表达量较高。Bmae35在雌蛾性信息腺中表达,并与性信息素合成呈正相关,暗示其在信息素合成中起重要作用。构建Bmae35与pET28(a)重组载体,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导,电泳检测发现该基因以包涵体形式表达,以镍亲和层析柱纯化,Western blotting鉴定证实Bmae35在大肠杆菌Escherichiacoli中正确表达并得以纯化。本实验通过对家蚕Bmae35基因的克隆、原核表达与纯化,为进一步深入研究其表达定位和气味降解等功能奠定基础。