大豆BBi基因ihpRNA种子特异性表达载体的构建

编号 zgly0001392935

文献类型 期刊论文

文献题名 大豆BBi基因ihpRNA种子特异性表达载体的构建

作者 付永平  张君  王丕武  周海涛  曲静 

作者单位 吉林农业大学农学院 

母体文献 西北农林科技大学学报(自然科学版 

年卷期 2010年01期

年份 2010 

分类号 S565.1 

关键词 大豆  蛋白酶抑制剂BBi基因  ihpRNA表达载体  种子特异性启动子 

文摘内容 【目的】构建具有大豆蛋白酶抑制剂BBi基因反向重复结构的ihpRNA种子特异性表达载体,并将其转入根癌农杆菌中,为大豆品质改良奠定基础。【方法】采用PCR技术克隆大豆蛋白酶抑制剂BBi基因的正义和反义片段、大豆种子特异性启动子7αP和作为内含子的GFP基因片段,分别连入克隆载体pMD18-T Vector中。然后根据植物中ihpRNA原理,以植物表达载体pCAMBIA1301为基础,将组成RNAi载体的4个目的片段分别连入其中,然后利用冻融法转化根癌农杆菌,并进行PCR鉴定。【结果】PCR扩增得到组成RNAi载体的4个目的片段,分别构建成重组克隆载体和ihpRNA种子特异性表达载体p7αP-GFP-BBiS,并转化得到含有p7αP-GFP-BBiS的农杆菌EHA101和EHA105。【结论】成功构建了具有BBi基因反向重复结构的ihpRNA种子特异性表达载体p7αP-GFP-BBiS,BBi基因的ihpRNA表达框架成功转入到农杆菌中。