甘蓝型油菜种子特异性表达fad2基因的ihpRNA载体构建

编号 zgly0000474158

文献类型 期刊论文

文献题名 甘蓝型油菜种子特异性表达fad2基因的ihpRNA载体构建

作者 陈松  张杰夫  陈峰  陈新军  龙卫华  浦惠明  戚存扣 

作者单位 江苏省农业科学院经济作物研究所 

母体文献 中国油料作物学报 

年卷期 2006,28(3)

页码 251-256

年份 2006 

分类号 S565.4  Q943.2 

关键词 甘蓝型油菜  fad2基因  ihpRNA表达载体 

文摘内容 旨在通过转基因途径诱导油菜种子中fad2基因发生转录后基因沉默, 本文构建了fad2基因的ihpRNA植物表达载体。通过PCR扩增分离到甘蓝型油菜种子特异性表达的Napin启动子序列(1147bp)以及油酸脱饱和酶基因(fad2)的一个537bp的片段, 并将它们分别克隆到pGEM—T easy载体中。利用中间载体pHurrican构建fad2基因的反向重复框。将fad2基因片段以正向的方式连接在一个可剪切的内含子的5’末端, 而以反向的方式连接到该内含子的3’末端; 然后将Napin启动子序列连接到该反向重复框的5’端, 而在其3’端接有一个nos终止子序列; 最后将fad2基因的反向重复表达框分两步克隆到植物双元载体pCAMBIA2300的pUC18多克隆位点, 构建具有种子特异性表达的fad2基因的ihpRN丸表达载体pCNFIRnos。限制性内切酶酶切对载体作了鉴定分析。