IκBα缺失突变体真核表达载体的构建、表达及其生物活性检测

编号 zgly0000639186

文献类型 期刊论文

文献题名 IκBα缺失突变体真核表达载体的构建、表达及其生物活性检测

作者 黄思超  杜军  邱胜红  徐俊  傅刘鹏  马锦珊  蔡绍晖 

作者单位 暨南大学药学院  中山大学药学院 

母体文献 生物技术通报 

年卷期 2009(11)

页码 83-88

年份 2009 

分类号 Q782  S763.712.4 

关键词 IκBα  缺失突变体  载体构建  NF-κB 

文摘内容 旨在构建缺失N端前36个氨基酸的IκBα突变体真核表达载体,并对其表达及生物学活性进行检测。从人源子宫颈癌细胞HeLa中提取总RNA,利用RT-PCR的方法获得IκBα缺失突变体的cDNA,将其克隆至真核表达载体pcDNA3.1/myc-HisA中,构建重组载体pcDNA3.1-IκBαΔN。通过PCR方法、NcoⅠ酶切以及核酸测序分析对其进行鉴定;采用WesternBlot检测IκBα缺失突变体蛋白在HeLa细胞中的表达。将pcDNA3.1-IκBαΔN和pNF-κB-Luc共转染HeLa细胞,经TNF-α诱导后,利用萤光素酶报告系统来检测重组载体对NF-αB的抑制活性。结果表明,经PCR方法、NcoⅠ酶切鉴定及核酸测序分析后,证实成功构建了重组载体pcDNA3.1-IκBαΔN;IκBα缺失突变体蛋白在HeLa细胞中高效表达,并对NF-κB有显著的抑制活性（P〈0.01）。因此,真核表达载体pcDNA3.1-IκBαΔN构建成功,为一步研究NF-κB信号传导通路及其相关疾病提供有效的分子工具。