含吸氢酶基因（hup）嵌合质粒的构建和吸氢酶活性在阴沟肠杆菌中的表达

编号 zgly0001172315

文献类型 期刊论文

文献题名 含吸氢酶基因（hup）嵌合质粒的构建和吸氢酶活性在阴沟肠杆菌中的表达

作者 吴永强  朱美珍  梁建光  华征  宋鸿遇 

作者单位 中国科学院上海植物生理研究所 

母体文献 植物生理学报 

年卷期 1996年03期

年份 1996 

分类号 Q945 

关键词 吸氢酶基因  固氮细菌  接合转移  吸氢酶  阴沟肠杆菌 

文摘内容 以质粒ｐＲＫ４０４为载体亚克隆含大豆根瘤菌吸氢酶结构基因（ｈｕｐ）的片段，构建成嵌合质粒ｐＨＲ１１、ｐＨＲ４和ｐＨＲ１０。通过三亲本杂交将这些嵌合质粒导入无吸氢活性的Ｒｈｏｄｏｂａｃｔｅｒｓｐｈａｅｒｏｉｄｅｓ２４１菌株（Ｈｕｐ－），均获得Ｈｕｐ＋的接合子。利用启动子检测质粒ｐＭＰ２２０证明，在ｈｕｐ对结构基因上游１．２ｋｂ内存在ｈｕｐ启动基因片段。以ｐＲＫ２０１３为助质粒可将ｐＨＲ１１导入Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｃｌｏａｃａｅ和Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａｏｘｙｔｏｃａ等土壤固氮菌株。本文以接合子Ｅ．ｃｌｏａｃａｅＥＨ１１１３为例，通过对基因组ＤＮＡＳｏｕｔｈｅｒｎ杂交分析证明，嵌合质粒ｐＨＲ１１在ＥＨ１１１３中稳定贮存和复制。Ｈ２诱导接合子ＥＨ１１１３吸氢酶活性高表达，吸氢活性与放氢活性比值约为对照的两倍。当以延胡索酸为电子受体时，吸氢酶的吸氢作用支持菌株固氮酶活性的提高。