香蕉果实采后抑制差减文库的构建与鉴定

编号 zgly0001304190

文献类型 期刊论文

文献题名 香蕉果实采后抑制差减文库的构建与鉴定

作者 徐碧玉  苏伟  金志强 

作者单位 中国热带农业科学院热带生物技术研究所  热带作物生物技术国家重点实验室  热带作物生物技术国家重点实验室 海口  571101  海口  571101 

母体文献 分子植物育种 

年卷期 2005年04期

年份 2005 

分类号 S668.1 

关键词 抑制差减杂交  差异表达基因  香蕉果实 

文摘内容 抑制差减杂交技术(suppressionsubtractivehybridization,SSH),是抑制PCR与差减杂交技术相结合而产生的。其优点是在差减杂交过程中使不同丰度cDNA的拷贝数差异趋于均衡,因此不同丰度的差异表达基因都能得到有效克隆,能有效分离低丰度的差异表达基因,避免了表达序列标签分析中高丰度基因重复测序的缺点。因此SSH技术被应用于植物差异表达基因的分离。香蕉果实采后成熟过程中发生一系列复杂的生理变化,这些变化涉及到许多基因的表达。为了研究香蕉果实采后与采前在基因表达上的差异,我们首次采用抑制缩减文库的方法,以分离香蕉果实在采后表达的基因。以采后0h的香蕉果实cDNA为驱动子,对香蕉果实采后48h果实cDNA为待测子,进行抑制缩减杂交,抑制缩减杂交产物与pGEM-TEasyVecter连接,转化E.coliDH5琢,构建了抑制缩减文库。该文库共包含312个克隆,采用PCR方法对文库进行了重组子的鉴定,共有302个重组子。该文库的构建成功为深入研究香蕉果实采后基因的表达奠定了基础,为研究香蕉果实采后成熟的分子生物学机理提供了一个新的思路。