唐古特白刺蛋白激酶基因NtCIPK2超表达载体构建及紫花苜蓿转化研究

编号 zgly0001624849

文献类型 期刊论文

文献题名 唐古特白刺蛋白激酶基因NtCIPK2超表达载体构建及紫花苜蓿转化研究

作者 郑琳琳  王佳  贺龙梅  王学峰  王迎春 

作者单位 内蒙古大学生命科学学院内蒙古自治区牧草与特色作物生物技术重点实验室  内蒙古和信园蒙草抗旱绿化股份有限公司 

母体文献 草业学报 

年卷期 2013年06期

年份 2013 

分类号 S816 

关键词 紫花苜蓿  NtCIPK2基因  超表达载体  遗传转化 

文摘内容 环境因素如高盐、干旱或冷冻等严重制约着豆科重要牧草紫花苜蓿的生长发育和产量。根据已发表的盐生植物唐古特白刺蛋白激酶基因NtCIPK2的序列信息(序列号KC823044),利用PCR方法扩增其编码区cDNA,连接pMD-19Tsimple载体并测序,测序结果表明所克隆的DNA片段长度为1362bp,与GenBank上公布的序列完全一致。在此基础上构建植物超表达载体pPZP221-NtCIPK2,采用CaCl2冻融法将该表达载体转入农杆菌GV3101中,然后通过农杆菌介导的方法转化紫花苜蓿的下胚轴,形成愈伤组织后经庆大霉素筛选培养,最终获得7株抗性幼苗。对抗性幼苗进行庆大霉素基因的PCR检测,结果表明,NtCIPK2基因成功整合到紫花苜蓿基因组中,进一步对其进行外源基因的RT-PCR检测,发现只有3株幼苗中的外源基因实现了过量表达,这可能是由于基因插入位点的差异引发的基因沉默所致。本研究的开展为进一步分析转化植株在各种逆境胁迫条件的表现及其遗传稳定性,培育具有多重抗逆能力的苜蓿品种,促进苜蓿产业发展奠定基础。