拟南芥abi5基因的分子克隆及其在原核细胞中的表达和纯化

编号 zgly0001479513

文献类型 期刊论文

文献题名 拟南芥abi5基因的分子克隆及其在原核细胞中的表达和纯化

作者 马燕林  马建忠  王永刚 

作者单位 兰州理工大学生命科学与工程学院 

母体文献 植物生理学报 

年卷期 2014年02期

年份 2014 

分类号 Q943 

关键词 拟南芥  abi5  分子克隆  原核表达  纯化  质谱 

文摘内容 拟南芥abi5基因编码了一个碱性亮氨酸拉链类转录因子,它在ABA信号转导过程中发挥着关键调控作用。本文以拟南芥为材料,通过RT-PCR扩增、克隆了包含abi5基因编码区的片段。核苷酸序列分析表明,所克隆的基因与NCBI数据库收录的abi5基因（GenBank登录号NM129185.3）有99.0%的一致性;氨基酸序列存在4个残基差异。所克隆的abi5基因被进一步亚克隆至pET-32a表达载体。序列测定核实构建正确的重组质粒（pET32a-ABI5）转化入大肠杆菌BL21 Star（DE3）中诱导表达。表达产物经Ni-NTA亲和层析柱分离纯化、SDS-PAGE分析和质谱鉴定。结果表明,重组abi5基因在大肠杆菌表达的较适宜条件为:异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）终浓度为0.3 mmol?L-1、30℃下诱导4 h,可达到细菌裂解液上清蛋白的29.1%。经Ni-NTA亲和层析柱纯化后的ABI5融合蛋白在SDS-PAGE电泳分析时呈现一条蛋白带。该条带经串联质谱分析证明为重组ABI5融合蛋白。