梨火疫病菌Sec依赖分泌蛋白EAMY＿3046的鉴定及其原核表达

编号 zgly0001709925

文献类型 期刊论文

文献题名 梨火疫病菌Sec依赖分泌蛋白EAMY＿3046的鉴定及其原核表达

作者 严海璘  朱宗财  张王斌  杜培秀  张超  赵文军  李为民 

作者单位 塔里木大学植物科学学院  中国农业科学院生物技术研究所  中国检验检疫科学研究院 

母体文献 植物检疫 

年卷期 2020年04期

年份 2020 

分类号 S41-30 

关键词 梨火疫病菌  EAMY3046  Sec依赖分泌蛋白  原核表达 

文摘内容 梨火疫病菌（Erwinia amylovora）是我国进境植物检疫性有害生物,针对其开展病原生物学研究,以及建立准确、快速、灵敏的检测方法至关重要。本研究从梨火疫菌株DSM 17948克隆了EAMY3046蛋白的编码基因Ea3046。该基因全长660 bp,编码220个氨基酸（amino acid,AA）。利用生物信息学与大肠杆菌碱性磷酸酯酶（alkaline phosphatase,PhoA）检测体系,明确EAMY3046蛋白具有Sec依赖分泌特性,其N-端17个氨基酸为信号肽（signal peptide,SP）,C-端为成熟蛋白,包含203个氨基酸,命名为mEa3046。将DSM 17948菌悬液接种梨幼果,分别在0、8、24 h取样,提取总RNA,进行实时荧光定量PCR分析,结果显示Ea3046在梨火疫病菌侵染寄主植物过程中表达量显著上升,在8 h和24 h分别上调2.27倍和1.68倍。此外,构建原核表达载体pET-mEa3046,导入大肠杆菌BL21,经IPTG诱导16 h后,mEa3046在15℃条件下的表达量高于其在37℃的表达量,且蛋白以包涵体形式存在;利用Ni-IDA亲和层析纯化目标蛋白,经SDS-PAGE分析表明m Ea3046蛋白纯化成功。上述研究为EAMY3046抗体制备奠定了基础。