美国白蛾核型多角体病毒ORF72原核表达载体的构建、表达及纯化

编号 zgly0001645971

文献类型 期刊论文

文献题名 美国白蛾核型多角体病毒ORF72原核表达载体的构建、表达及纯化

作者 李娜  李恩杰  王青华  王玉珠  张永安  段立清 

作者单位 内蒙古农业大学林学院  中国林业科学研究院森林生态环境与保护研究所 

母体文献 林业科学研究 

年卷期 2018年05期

年份 2018 

分类号 S763.42 

关键词 美国白蛾核型多角体病毒  ORF72  载体构建  诱导表达  纯化 

文摘内容 [目的]根据Ikdea对Hycu NPV全基因组序列的分析,筛选出功能还未被研究的、保守性高的ORF72基因。[方法]将ORF72基因构建到原核表达载体p GEX-4T-1上,对其进行诱导表达,优化表达的条件,并通过GST亲和层析色谱柱纯化融合蛋白。[结果]重组质粒p GEX-4T-1-ORF72的酶切检测以及测序结果均正确,证明重组质粒载体构建成功。通过SDS-PAGE凝胶电泳显示,ORF72蛋白能够与p GEX-4T-1载体上的GST标签蛋白进行融合表达,诱导表达后的融合蛋白大小约为38. 2 k Da。优化后的表达条件为:异丙基硫代β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导浓度为1. 0 mmol·L-1,最佳诱导温度为25℃,最佳诱导时间为4 h,并且该蛋白在大肠杆菌BL21和Rosetta表达菌株中均能很好的表达,但在Rosetta菌株中表达量更高。[结论]成功构建了p GEX-4T-1-ORF72原核表达载体,确定出ORF72融合蛋白最佳诱导表达条件,诱导表达并纯化出ORF72融合蛋白,为进一步研究其生物功能奠定基础。