油松SSR-PCR引物筛选及反应体系的建立

编号 zgly0000508686

文献类型 期刊论文

文献题名 油松SSR-PCR引物筛选及反应体系的建立

学科分类 220.99;林学其他学科

作者 张冬梅  杨娅  沈熙环  茹广欣 

作者单位 上海市园林科学研究所  河南职业技术学院  北京林业大学生物科学与技术学院  河南农业大学林学园艺学院 

母体文献 北京林业大学学报 

年卷期 2007,29(2)

页码 13-17

年份 2007 

分类号 S791.254  S718.46 

关键词 油松  SSR标记  引物  反应体系  优化 

文摘内容 油松是我国特有的重要乡土针叶树种, 开发合适的油松PCR-SSR引物并建立优化的反应体系, 是开展油松天然群体和种子园人工群体遗传研究的基础。该研究以油松总DNA为材料, 分析了Taq聚合酶、样本浓度、Mg^2+浓度、dNTP浓度以及引物浓度对PCR-SSR扩增结果的影响, 筛选出扩增条带清晰、多态性丰富的SSR引物12对, 建立了稳定的、可重复的油松PCR-SSR最佳反应体系及PCR扩增参数。研究结果表明: 在15pLSSR-PCR反应体系中, 样本最适宜浓度为30ng, Mg^2+的最适浓度为0.25mmol/L, dNTP最适浓度为0.2mmog/L, 单引物的最适浓度均为250nmol/L; Taq聚合酶在15止反应体系中宜加入0.375U.统计利用所选12对引物, 对辽宁兴城油松种子园内49个建园无性系进行了SSR-PCR反应, 通过6%的变性聚丙稀酰胺凝胶电泳检测, 每对引物扩增产物在100—250bp之间的等位谱带数最大为10, 最小为5, 不同无性系间DNA谱带多态性丰富,油松SSR-PCR引物筛选及反应体系的建立, 为今后利用SSR标记技术开展油松种子园的父本分析及选择性受精研究提供了一个标准化程序和强有力的工具。