结缕草SSR反应体系的正交优化(英文)

编号 zgly0001339951

文献类型 期刊论文

文献题名 结缕草SSR反应体系的正交优化(英文)

作者 桂金山  王赟文  方程 

作者单位 中国农业大学草地研究所农业部草地植被恢复与重建重点开放实验室  中国农业大学草地研究所农业部草地植被恢复与重建重点开放实验室 北京100094  北京100094 

母体文献 草地学报 

年卷期 2008年01期

年份 2008 

分类号 S688.4 

关键词 结缕草  SSR标记  反应体系  正交设计  优化 

文摘内容 为了快速获得结缕草(Zoysia japonica)SSR反应体系,采用5因素(模板DNA,Mg2+,dNTP,Taq酶和引物)4水平正交设计筛选合适的结缕草SSR体系,并通过随机挑选3对Tm相近的引物对该优化体系进行验证。结果表明:正交设计可应用于SSR-PCR反应体系的优化,20μl最佳PCR反应体系中包括2μl 10×buffer、1.0 U Taq酶、0.2 mM引物、100 ng模板DNA、0.2 mMdNTP、2.0 mM Mg+;对结缕草进行梯度退火实验,其最佳退火温度为56~58℃;可行扩增程序是:94℃预变性4 min、进行35个循环的94℃变性30 s、56~58℃退火40 s,72℃延伸1 min;72℃延伸10 min,4℃保存;该最适反应体系的建立,为今后结缕草SSR分析奠定了坚实基础。