家蚕富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白基因BmSPARC的表达及亚细胞定位

编号 zgly0001371084

文献类型 期刊论文

文献题名 家蚕富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白基因BmSPARC的表达及亚细胞定位

作者 朱玉娟  吕正兵  陈琴  聂作明  王丹  陈健  刘立丽  郑青亮  陈剑清  沈红丹  盛清  全滟平  徐杰  张文平  吴祥甫  张耀洲 

作者单位 浙江理工大学生物化学研究所浙江省家蚕生物反应器和生物医药重点实验室 

母体文献 蚕业科学 

年卷期 2009年02期

年份 2009 

分类号 S881.2 

关键词 家蚕  富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白基因  亚细胞定位  实时荧光定量PCR 

文摘内容 富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白(secreted protein acidic and rich in cysteine,SPARC)是一种小分子酸性糖蛋白,在有机体内广泛分布,通过与胞外基质蛋白相互作用而表现出多种生物活性。从家蚕蛹cDNA文库中获得SPARC基因(BmSPARC)的cDNA序列,GenBank登录号为FJ602783。利用生物信息学方法对此序列进行分析表明,BmSPARC的cDNA序列全长1 626 bp,含有1个954 bp的开放阅读框(ORF),编码317个氨基酸残基;同源性比较显示该基因编码蛋白的氨基酸序列在无脊椎动物中具有较高的保守性。将BmSPARC片段在大肠杆菌BL21中表达并纯化后,免疫新西兰兔制备多克隆抗体,通过亚细胞定位研究发现该基因表达蛋白主要存在于细胞质中。利用实时荧光定量PCR的方法,对BmSPARC在家蚕不同发育时期、不同组织中的mRNA转录水平进行比较,并采用Western blotting方法对BmSPARC蛋白的表达进行分析,结果表明:BmSPARC在家蚕卵期和5龄幼虫丝腺组织中无表达,而在5龄幼虫、蛹、蛾发育时期及5龄幼虫的头部、脂肪体、中肠、马氏管、卵巢、表皮和气门等7个组织中均有不同程度的表达,其中在蛾期和5龄幼虫卵巢中的表达量较高。研究结果为进一步探讨BmSPARC在家蚕生长发育过程中的生物学功能打下了基础。