基于纳米颗粒的赭曲霉毒素A高灵敏酶联免疫检测方法的建立及应用

编号 zgly0001706409

文献类型 期刊论文

文献题名 基于纳米颗粒的赭曲霉毒素A高灵敏酶联免疫检测方法的建立及应用

作者 章先  何珂  黄志伟  单颖  曹统  谢珲  宋厚辉 

作者单位 浙江农林大学动物科技学院动物医学院  浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室  动物健康检测互联网技术浙江省工程实验室  浙江大学动物科学学院  浙江省医学科学院 

母体文献 菌物学报 

年卷期 2020年03期

年份 2020 

分类号 TS207.5 

关键词 赭曲霉毒素A  纳米磁珠  纳米金  生物素-亲和素系统  定量检测 

文摘内容 赭曲霉毒素（ochratoxins）主要是由青霉菌Penicillium和曲霉菌Aspergillus产生的有毒次级代谢产物,常见于发霉或发酵的农产品中,其中赭曲霉毒素A（ochratoxin A,OTA）毒性最强且最为普遍。OTA是粮食作物和饲料的重要污染物,在加工、储存或运输过程中均可产生,具有肾毒性和免疫毒性,可通过蓄积作用发挥毒性效应,对人类和动物健康造成严重威胁。本研究通过将OTA单克隆抗体包被于纳米磁珠（magnetic nanoparticles,MNPs）表面,获得具有免疫活性的磁珠抗体复合物（MNPs-Anti OTA）,并制备生物素标记的偶联抗原OTA-BSA-Bio,后续采用链酶亲和素标记的纳米金颗粒（Strep-HRP-AuNPs）催化底物进行信号检测,最终建立了OTA高灵敏检测方法（MNPs-bs-AuNPs-ELISA）。在最优条件下,经计算该方法检测下限(IC10)为0.01ng/mL,检测区间(IC20–IC80)为0.02–0.73ng/mL,半数抑制率(IC50)为0.13ng/mL。与OTA类似物OTB、OTC交叉反应性为4.3%和8.1%,对其他常见真菌毒素AFB1、ZEN、FB1、DON、CIT和PAT均无交叉反应。玉米、面粉和大豆样本中的加标回收率可达85.6%–115.7%,对天然样本中OTA含量的检测结果表明,该方法与LC-MS/MS相关性良好。本研究建立的MNPs-bs-AuNPs-ELISA可满足谷物及饲料样本中OTA的快速、高灵敏度定量检测,成本较低,具有很好的应用前景。