洋葱伯克霍尔德氏菌HMW DNA的制备及酶切研究

编号 zgly0000632909

文献类型 期刊论文

文献题名 洋葱伯克霍尔德氏菌HMW DNA的制备及酶切研究

学科分类 220.1520;林木遗传学

作者 王筱青  喻晓蔚  徐岩  顾玲 

作者单位 江南大学生物工程学院酿造微生物与应用酶学研究室  江苏省疾病预防控制中心CDC急传科 

母体文献 生物技术通报 

年卷期 2009(3)

页码 137-142

年份 2009 

分类号 Q523  S763.11 

关键词 高分子量DNA  粘粒文库  胶块  脉冲场电泳 

文摘内容 高质量粘粒基因组文库构建的关键是HMW DNA的长度至少为粘粒载体容量的10倍，通常粘粒载体的容量为30-50kb，因此提取的HMW DNA应不小于500kb。HMW DNA在制备时不能受到任何物理的剪切力，以免DNA断裂和损伤。利用琼脂糖凝胶包埋制备的DNA胶块经裂解和纯化后发现其DNA长度远大于500kb，明显优于商品化试剂盒提取和酚抽提法。用BamH Ⅰ、Sau3A Ⅰ、Xba Ⅰ和HindⅢ对DNA胶块进行不完全酶切研究表明，构建文库常用的Sau3A Ⅰ并不适合胶块内酶切反应，而BamHⅠ酶切B．cepacia HMW—DNA效果较好，产生的DNA片段集中在20-50kb之间，完全适合粘粒基因组文库的构建，为B．cepacia大插入片段基因组文库的构建以及功能基因组的研究奠定了良好的理论基础。