基于BIBAC文库的芦苇高分子量核DNA的制备方法

编号 zgly0001566114

文献类型 期刊论文

文献题名 基于BIBAC文库的芦苇高分子量核DNA的制备方法

作者 杨俊  高鸿  周申遒  顾骁  邓玉清  罗越华  马启林 

作者单位 海南大学农学院 

母体文献 分子植物育种 

年卷期 2017年11期

年份 2017 

分类号 S564.2 

关键词 芦苇  高分子量DNA  细胞核DNA  脉冲场凝胶电泳  BIBAC文库 

文摘内容 获得高质量的高分子量核DNA(HMW-DNA)是大片段DNA插入BIBAC载体的重要前提。为避免多酚等次生代谢物质对DNA的污染,前人研究多以黄化苗为材料。本研究对传统的Zhang等(1995)方法进行改良,以野生耐盐芦苇(Phragmites australis Trin.)的成熟叶片为材料,成功制备了高质量的芦苇高分子量核DNA(HMW-DNA)。改良Zhang法适合野生耐盐芦苇HMW-DNA的提取,提取过程更加温和,得到的细胞核相对纯净、完整度较高,后续蛋白酶K消化效果好,便于酶切。脉冲场凝胶电泳显示,本研究方法所制备的野生芦苇HMW-DNA的分子量大于1 Mb,经Bam HⅠ酶切后可获得较多的100~200 kb大片段DNA。因此,野生耐盐芦苇高分子量DNA质量完全满足芦苇BIBAC文库构建的要求。