环介导等温扩增法鉴定检测冬虫夏草

编号 zgly0000770143

文献类型 期刊论文

文献题名 环介导等温扩增法鉴定检测冬虫夏草

学科分类 220.1520;林木遗传学

作者 李奎  李琦  袁媛  陈江源  黄璐琦  刘志国 

作者单位 武汉工业学院生物与制药工程学院  中国中医科学院中药研究所 

母体文献 中草药 

年卷期 2011,42(8)

页码 1605-1608

年份 2011 

分类号 R282.5 

关键词 冬虫夏草  环介导等温扩增  鉴定  检测  检出限 

文摘内容 目的建立冬虫夏草的环介导等温扩增(100p.mediated isothermal amplification, LAMP)方法, 实现对冬虫夏草的快速检测。方法针对冬虫夏草的CS2 serine protease(csp2)基因设计LAMP内外引物对; 利用CTAB法提取冬虫夏草DNA; 优化扩增反应条件; 采用包括冬虫夏草在内的6种不同虫草进行LAMP扩增, 并对阳性产物酶切鉴定以检测其特异性, 通过对模板DNA的10倍梯度稀释检测其灵敏度; 紫外灯下观察凝胶电泳或加入荧光染料SYBR Green I的扩增产物。结果设计的LAMP引物可以特异地针对冬虫夏草的csp2基因进行LAMP扩增, 产物可被限制性内切酶Taql酶切, 且有较高的灵敏度, 检出限达6pg/mL。结论LAMP法可以实现对冬虫夏草的快速鉴定检测, 在中药鉴定中有着广阔的应用前景。