2种鸡柔嫩艾美耳球虫DNA疫苗的构建及在鸡体内的表达

编号 zgly0001305985

文献类型 期刊论文

文献题名 2种鸡柔嫩艾美耳球虫DNA疫苗的构建及在鸡体内的表达

作者 格日勒图  徐立新  严若峰  李祥瑞 

作者单位 南京农业大学动物医学院  南京农业大学动物医学院 江苏 南京 210095  江苏 南京 210095 

母体文献 西北农林科技大学学报(自然科学版 

年卷期 2005年12期

年份 2005 

分类号 S852.52 

关键词 柔嫩艾美耳球虫  MZ5-7基因  IL-17  DNA疫苗  鸡 

文摘内容 利用DNA重组技术,将柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenalla)第2代裂殖子抗原基因MZ5-7的完整 阅读框(ORF,945 bp)克隆到真核表达质粒pcDNA4．0中,构建了DNA疫苗pcDNA4．0-MZ。用同样方法,将鸡成 熟白细胞介素-17(IL-17)基因的完整阅读框(507 bp)与MZ5-7基因串连,使MZ5-7基因位于IL-17基因的上游, 将串连基因克隆到pcDNA4．0中,构建成免疫调节型DNA疫苗pcDNA4．0-MZ-IL-17。2种DNA疫苗纯化后,胸 部肌肉注射免疫1周龄雏鸡(50 μg／鸡),在免疫后3．5,7,15和20 d取注射和非注射部位肌肉组织,分别用RT- PCR和Western blot方法检测抗原基因转录和表达情况。结果表明,在2种疫苗免疫后5,7和15 d,用RT-PCR 方法在注射部位均可检测到MZ5-7基因的转录产物,大小约950 bp,但在免疫第3天和20天的肌肉组织中未检测 到表达产物。相同时间用Western blot方法进行检测,结果在免疫5和7 d的鸡肌肉组织中检测到表达产物,pcD- NA4．0-MZ表达产物大小约36 ku,与理论推测值一致,pcDNA4．0-MZ-IL-17表达产物大小约64 ku,较MZ5-7和 IL-17基因之和的理论推测值58 ku略大。但在非注射部位,两种方法均未检测到转录或表达产物。上述结果表明, 通过肌肉注射后,两种DNA疫苗均可在鸡肌肉组织中得到有效表达。