牛γ-干扰素ELISA检测方法的建立与初步应用

编号 zgly0001383310

文献类型 期刊论文

文献题名 牛γ-干扰素ELISA检测方法的建立与初步应用

作者 陈祥  牛中伟  徐正中  孟闯  孙林  黄金林  潘志明  焦新安 

作者单位 扬州大学江苏省人兽共患病学重点实验室 

母体文献 中国动物传染病学报 

年卷期 2010年04期

年份 2010 

分类号 R392.11 

关键词 牛  γ-干扰素  抗原捕获ELISA  单克隆抗体 

文摘内容 以纯化的rHis-BoIFN-γ制备兔多抗血清,辛酸—硫酸铵两步法对体内诱生的抗rBoIFN-γ单抗腹水进行纯化,用美洲商陆素(Pokeweed mitogen,PWM)刺激奶牛全血产生的分泌性天然BoIFN-γ筛选出与之反应最佳的单抗5E11。将单抗5E11以40μg/mL浓度包被,与1∶3 000倍稀释的兔抗rHis-BoIFN-γ多抗血清(13.8μg/mL)配对,以1∶6 000稀释的商品化酶标羊抗兔IgG为指示抗体,建立了BoIFN-γ抗原捕获ELISA检测方法,该方法可以检出2.56 U/100μL(30.5 pg/100μL)的rHis-BoIFN-γ、8U/100μL的rBac-BoIFN-γ和1U/100μL的分泌性天然BoIFN-γ。以商品化试剂盒作为平行对照,将获得的奶牛临床检测血浆样品使用BoIFN-γ抗原捕获ELISA法进行检测,结果显示两种方法检测符合率达到83.9%。本研究建立的BoIFN-γ抗原捕获ELISA检测方法可有效检测分泌性IFN-γ,为进一步开发BoIFN-γELISA检测试剂盒奠定了基础。