含PRRS病毒ORF5的伪狂犬病病毒TK基因缺失转移载体的构建

编号 zgly0001222545

文献类型 期刊论文

文献题名 含PRRS病毒ORF5的伪狂犬病病毒TK基因缺失转移载体的构建

作者 仇华吉  周彦君  孔令达  张绍杰  钱平  王柳  童光志 

作者单位 哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室!哈尔滨150001  哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国? 

母体文献 动物医学进展 

年卷期 2000年04期

年份 2000 

关键词 伪狂犬病病毒  TK基因  基因缺失  转移载体 

文摘内容 提取伪狂犬病病毒 ( PRV) Bartha-K6 1株基因组 DNA,用限制性内切酶 Kpn I充分消化 ,回收 5 .9kb片段 ( J片段 ) ,将其克隆于质粒 p UC1 1 9Kpn I位点上 ,获得 p BKJ。用两对针对 PRV TK基因的特异性引物对重组质粒进行 PCR鉴定 ,证明其中含有 PRVTK基因。然后用 Kpn I、Pst I和 Bam HI等限制性内切酶对其进行酶切分析 ,确定了克隆片段的物理图谱。进一步研究证实 TK基因位于其中的 Kpn I- Bam HI或 Kpn I- Pst I片段中。然后亚克隆此 Kpn I- Pst I片段 ,并进行了序列测定 .用 Acc I删去 378bp后 ,并插入CMV启动子控制下的猪生殖 -呼吸道综合征病毒 ( PRRSV) ORF5 ,构建了转移载体质粒p Bd TK- CMV- ORF5。本研究为 PRV活载体的改造和利用奠定了基础。