通过原位易错PCR一步构建基因突变文库

编号 zgly0000889388

文献类型 期刊论文

文献题名 通过原位易错PCR一步构建基因突变文库

学科分类 220.1520;林木遗传学

作者 王未未  张永昌  刘明杰  邵蔚蓝 

作者单位 南京师范大学生命科学学院  江苏大学环境学院生物质能源研究所 

母体文献 微生物学通报 

年卷期 2014(4)

页码 719-724

年份 2014 

关键词 定向进化  随机突变文库  原位易错PCR  环状质粒扩增(PPCP) 

文摘内容 主要介绍一种通过原位易错PCR构建随机突变文库的新技术。本实验室最近发表的一项国际专利中,利用来源于海栖热孢菌的极耐热性DNA连接酶,在传统PCR循环中加入一个连接步骤,即变性—退火—延伸—连接的四步循环法PCR,从而实现环状质粒的PCR指数扩增(PPCP)。原位易错PCR中所用引物为一段线性双链DNA,它含有与模板质粒不同的筛选标记,产物转化宿主菌后,模板质粒在筛选平板上被直接剔除。筛选到的阳性突变子可用作模板直接进入突变文库的再次构建,通过筛选获得二级或多级累加的正突变。