A型塞内卡病毒VP1结构蛋白在昆虫杆状病毒中的表达与鉴定

编号 zgly0001723666

文献类型 期刊论文

文献题名 A型塞内卡病毒VP1结构蛋白在昆虫杆状病毒中的表达与鉴定

作者 张斌  刘建奇  张杰  韩宇  巨敏莹  乌吉斯古楞  宋庆庆  关平原 

作者单位 内蒙古农业大学兽医学院  金宇保灵生物药品有限公司兽医疫苗国家工程实验室 

母体文献 中国动物检疫 

年卷期 2020年12期

年份 2020 

分类号 S852.65 

关键词 猪塞内卡病毒  VP1蛋白  昆虫杆状病毒表达系统 

文摘内容 目前在昆虫杆状病毒表达系统(baculovirus expression vector system,BEVS)中表达A型塞内卡病毒(Senecavirus A,SVA)结构蛋白VP1尚未见报道。本研究将VP1基因通过限制性酶切位点插入杆状病毒载体pFastBac I,然后将鉴定正确的重组载体转化至DH10Bac感受态细胞,经蓝白斑筛选,对鉴定正确的菌落提取质粒。将质粒转染Sf9昆虫细胞,待有明显细胞病变后收获重组杆状病毒rBac-I-VP1,并进行病毒滴度测定。随后通过蛋白免疫印记(Western Blot)和间接免疫荧光(IFA)鉴定VP1蛋白表达情况。结果显示,重组杆状病毒r Bac-I-VP1滴度为6.8×105 pfu/mL;Western Blot可检测到相对分子质量约27 kDa的表达产物,且其能够被SVA兔阳性多克隆血清识别;IFA试验显示,VP1蛋白能够在Sf9细胞内表达。结果表明,本研究利用BEVS表达的SVA VP1蛋白具有良好的免疫反应性,为其后期功能研究及SVA诊断试剂研制提供了技术基础。