毛竹阿拉伯糖-5-磷酸异构酶的基因克隆、原核表达及纯化

编号 zgly0001533577

文献类型 期刊论文

文献题名 毛竹阿拉伯糖-5-磷酸异构酶的基因克隆、原核表达及纯化

作者 屈亚平  张智俊  王超莉  王蕾  吴林军 

作者单位 浙江农林大学亚热带森林培育国家重点实验室培育基地 

母体文献 浙江农林大学学报 

年卷期 2016年06期

年份 2016 

分类号 S795.7 

关键词 林木育种学  毛竹  阿拉伯糖-5-磷酸异构酶  基因克隆  原核表达  蛋白纯化 

文摘内容 毛竹Phyllostachys edulis阿拉伯糖-5-磷酸异构酶（Pe Kds D）是2-酮-3-脱氧辛糖酸（KDO）生物合成途径的第1个关键酶。采用逆转录实时聚合酶链式反应（q RT-PCR）克隆得到毛竹Kds D基因。该基因c DNA全长1 038 bp,编码346个氨基酸;对不同物种来源的Kds D氨基酸序列进行比对和系统进化树分析。结果表明:毛竹的Kds D与玉米Zea mays等植物来源的Kds D有很高的序列一致性,而与微生物来源的Kds D序列一致性较低。毛竹不同组织实时荧光定量聚合酶链式反应（q RT-PCR）结果表明:Pe Kds D基因在叶中表达量远远高于其他组织。在大肠埃希菌Escherichia coli原核表达系统中获得了Kds D的可溶性高表达蛋白,将大量表达的重组蛋白经过Ni-NTA亲和层析和分子筛层析（SEC）进行纯化,发现Kds D在溶液(30 mmol·L-1三羟甲基氨基甲烷pH 8.0,200 mmol·L-1氯化钠)中以多种聚体的形式存在;酶学性质测定的结果表明:毛竹Kds D酶最适pH值为pH 8.5,最适作用温度为37℃。此结果为后期研究植物Kds D蛋白的结构与功能奠定了基础。