银杏ISSR-PCR扩增反应体系的优化

编号 zgly0000556946

文献类型 期刊论文

文献题名 银杏ISSR-PCR扩增反应体系的优化

学科分类 220.1520;林木遗传学

作者 曹福亮  王国霞  李广平  花喆斌 

作者单位 南京林业大学森林资源与环境学院 

母体文献 浙江林学院学报 

年卷期 2008,25(2)

页码 186-190

年份 2008 

分类号 S718.46 

关键词 林木育种学  银杏  ISSR-PCR  反应体系 

文摘内容 为了对影响银杏戗ngkobiloba简单序列重复区间扩增-聚合酶链式反应(ISSR-PCR)扩增反应体系的因素进行优化，采用[SSR-PCR扩增技术和UVP凝胶电泳成像技术对模扳DNA浓度、Taq酶用量、引物用量、dNTP的用量以及退火温度等因素进行筛选和优化筛选优化后的反应条件：Taq酶0．3μg，2μL10×Buffer(含15mmol·L^-1 MgCl2)，模板DNA40ng，dNTP0．2mmol·L^-1，引物0．5μmol·L^-1，Mg^2＋，5nmol·L^-1。PCR扩增程序：94℃变性5min，然后进行38个循环：94℃变性30S，48～53℃(根据引物而定)退火30s，72℃延伸1min；最后72℃延伸10min，4℃终止反应。上述反应条件可广泛应用于银杏的遗传多样性分析、遗传育种和转基因等方面的研究。