高质量提取柑橘样品中病原总核酸方法的建立

编号 zgly0001467027

文献类型 期刊论文

文献题名 高质量提取柑橘样品中病原总核酸方法的建立

作者 苏华楠  王雪峰  黄爱军  李中安  唐科志  周常勇 

作者单位 西南大学植物保护学院  中国农业科学院柑桔研究所  赣南师范学院  国家脐橙工程技术研究中心 

母体文献 园艺学报 

年卷期 2014年11期

年份 2014 

分类号 S436.66 

关键词 柑橘  韧皮部杆菌  柑橘黄龙病  DNA提取  柑橘病害检测 

文摘内容 针对柑橘老熟组织中富含多糖、多酚、色素和其它次生代谢产物的特点,以柑橘老叶老皮为试材,在传统CTAB提取法的基础上通过添加增效剂并优化配方,建立了一种快速、简便的提取植物老熟组织及其内部病原总核酸的CTAB-Triton提取法。新的提取液对细胞的裂解能力更强,且解决了传统CTAB溶液因低温析出而致DNA得率损失的弊端。比较了该法和微量葡聚糖柱纯化法制备模板时韧皮部杆菌的检出率,并用该法制备模板,分析了韧皮部杆菌在柚子叶片中的分布情况,及对其它几种柑橘病原菌进行PCR/RT-PCR检测。结果表明,CTAB-Triton方法能有效提取柑橘老熟叶片的DNA,所得DNA质量高,产量比商品化试剂盒大,提高了韧皮部杆菌的检出率,且可用于柑橘其他病原真菌、细菌,以及DNA或RNA病毒病害的PCR/RT-PCR检测,也可用于定量PCR检测和病原种群多态性分析。