西花蓟马ISSR-PCR反应体系的建立与优化

编号 zgly0001397697

文献类型 期刊论文

文献题名 西花蓟马ISSR-PCR反应体系的建立与优化

作者 蒋兴川  和淑琪  杨明  李正跃  桂富荣 

作者单位 云南农业大学植物保护学院农业生物多样性与病虫害控制教育部重点实验室 

母体文献 生物安全学报 

年卷期 2011年03期

年份 2011 

分类号 S433 

关键词 西花蓟马  ISSR-PCR  反应体系  单因素试验  正交设计试验 

文摘内容 【背景】西花蓟马是近年来在我国局部地区暴发成灾的重要入侵害虫。【方法】本文通过改进的STE法提取西花蓟马的基因组DNA,对西花蓟马ISSR-PCR反应体系中的DNA、引物、Taq聚合酶、buffer缓冲液、dNTPs、Mg2+和去离子甲酰胺等7个影响因素进行了单因素试验,初步筛选出各因素的较优浓度;然后对影响较大的4个因素进行了正交设计试验L16(44),建立了适合西花蓟马ISSR分子标记的最佳反应体系。【结果】在20μL的反应体系中包含模板DNA30ng、10×Buffer2.0μL、引物1.05μmol·L-1、Taq聚合酶2.0U、dNTPs212.5μmol·L-1及MgSO42.25mmol·L-1。【结论与意义】利用采自云南昆明、玉溪、楚雄、红河、保山、昭通、丽江、大理和普洱9个地方的西花蓟马样本对所建立的反应体系进行检验,结果表明优化后的体系适用于西花蓟马的遗传多样性分析,本研究可为进一步研究西花蓟马的种群结构奠定基础。