UHS-拟蜘蛛拖丝蛋白基因转染小鼠成纤维细胞及其鉴定

编号 zgly0000745151

文献类型 期刊论文

文献题名 UHS-拟蜘蛛拖丝蛋白基因转染小鼠成纤维细胞及其鉴定

学科分类 220.1520;林木遗传学

作者 王春生  李晶  宁方勇  张秋婷  梁洋  朴善花  安铁洙 

作者单位 东北林业大学生命科学学院  东北农业大学动物科技学院 

母体文献 江西农业大学学报 

年卷期 2011,33(6)

页码 1202-1205,1235

年份 2011 

分类号 Q781 

关键词 蜘蛛拖丝蛋白基因二聚体  超高硫角蛋白启动子  真核表达载体  小鼠成纤维细胞  转基因 

文摘内容 为了获得转拟蜘蛛拖丝蛋白基因2S的阳性小鼠成纤维细胞,本研究将前期工作中人工合成的拟蜘蛛拖丝蛋白基因2S和克隆获得的小鼠超高硫角蛋白启动子(UHS),与带有IRES序列和GFP报告基因的表达载体连接,构建真核表达载体UHS-2S-pIRES2-EGFP;将UHS-2S-pIRES2-EGFP线性化后,采用脂质体法转染小鼠皮肤成纤维细胞,通过G418筛选获得neo基因抗性阳性细胞。结果表明: (1)成功构建UHS-2S-pIRES2-EGFP;(2)转基因细胞的最佳G418筛选浓度为400μg/mL;(3)筛选获得呈梭形的转基因细胞,对其进行传代培养时,细胞增殖缓慢,细胞未呈现正常细胞的＂S＂型的生长曲线;(4)PCR检测结果显示,UHS-2S-pIRES2-EGFP载体已经整合到G418抗性细胞的基因组中。