SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测PRRSV方法的建立

编号 zgly0001516829

文献类型 期刊论文

文献题名 SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测PRRSV方法的建立

作者 罗忠永  王印  杨泽晓 

作者单位 四川农业大学动物医学院动物检疫实验室 

母体文献 动物医学进展 

年卷期 2016年04期

年份 2016 

分类号 S852.651 

关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒  M蛋白  SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR 

文摘内容 根据编码PRRSV M蛋白的基因序列设计用于SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR扩增的引物,通过温度梯度法优化反应体系;以不同科属常见猪致病性RNA病毒疫苗验证该检测方法的特异性,参考国内PRRSV分子流行病学特征,选择基因型代表性的2株疫苗株验证该检测方法的稳定性;以10倍梯度稀释的质粒为标准品扩增并构建标准曲线,探究该检测方法的灵敏度,随机挑取10份保存的PRRSV阳性病料和10份阴性病料同时使用农业部推荐的PRRSV RT-PCR检疫标准方法和建立的方法进行检测,以确定2种方法检测的符合率。结果显示,使用建立的方法可以在54.4℃80min内完成对PRRSV的检测,该检测方法具有特异性和稳定性;检测灵敏度为6.8×10拷贝/μL;以Ct值为横坐标,扩增序列拷贝浓度的对数值为纵坐标,得到标准曲线,方程为y=-3.411 x+39.002,R2=0.999;对随机挑取的10份PRRSV阳性病料和10份阴性病料进行检测,结果2种方法检测结果的符合率100%。结果表明,成功建立了PRRSV SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR快速检测方法,为临床提供了一种很好的检测手段。