新孢子虫二温式PCR检测方法的建立及应用

编号 zgly0001516834

文献类型 期刊论文

文献题名 新孢子虫二温式PCR检测方法的建立及应用

作者 陈千林  王振宝  宋迎春  刘梦丽  许正茂  巴音查汗 

作者单位 新疆农业大学动物医学学院  伊犁出入境检验检疫局综合技术服务中心  巴音郭楞蒙古自治州动物疾病控制与诊断中心 

母体文献 动物医学进展 

年卷期 2016年04期

年份 2016 

分类号 S852.723 

关键词 新孢子虫  Nc2基因  二温式PCR 

文摘内容 根据新孢子虫Nc2基因保守区设计特异性引物,应用均匀设计法优化反应中Taq DNA聚合酶、引物浓度和退火温度等,建立新孢子虫二温式PCR检测方法。结果显示,扩增条带与预期目的片段大小(266bp)相符,未扩增出弓形虫等虫种的阳性DNA片段;扩增片段经克隆、测序发现与引物基因序列的同源性为100%;最低检出量为32.5fg/μL,是三步法PCR的10-1倍,但循环时间缩短了38min;重复3次对10-4、10-5、10-6和10-7稀释的阳性质粒进行二温扩增,10-7稀释均未出现扩增条带。同时对156份牛全血DNA进行检测,检出率为10.90%(17/156),与《新孢子虫病检疫技术规范》(SN/T 3499—2013)的检出符合率为83.33%(30/36),二者检测结果差异性不显著(P>0.05)。由此可见,建立的二温式PCR检测方法可用于临床诊断和日常监测新孢子虫,为监控带虫宿主提供技术支撑。