家蚕一种富含半胱氨酸蛋白基因BmCRP的原核表达与定位研究

编号 zgly0001371085

文献类型 期刊论文

文献题名 家蚕一种富含半胱氨酸蛋白基因BmCRP的原核表达与定位研究

作者 陈世慧  张文平  盛清  吕正兵  陈健  聂作明  王丹  刘丽丽  沈红丹  舒建洪  陈剑清  吴祥甫  张耀洲 

作者单位 浙江理工大学生物化学研究所浙江省家蚕生物反应器和生物医药重点实验室  中国科学院上海生命科学院生物化学与细胞生物学研究所 

母体文献 蚕业科学 

年卷期 2009年02期

年份 2009 

分类号 S881.2 

关键词 家蚕  富含半胱氨酸蛋白  基因组结构  细胞定位  组织分布  实时荧光定量PCR 

文摘内容 从家蚕蛹cDNA文库中获得一条cDNA序列,经生物信息学分析显示该cDNA序列全长1 011 bp,包括5′-UTR 200 bp和3-′UTR 136 bp,编码224个氨基酸,其编码蛋白质的N-端富含半胱氨酸,将该基因命名为BmCRP(基因登录号:DN985186.1)。该基因编码蛋白主要有α螺旋、β-折叠、无规则卷曲3种二级结构,具有cAMP和cGMP依赖的蛋白激酶磷酸化位点等5种功能位点。构建重组表达载体pET-28 a(+)-BmCRP并转化至大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导后获得融合蛋白,用纯化后的目的蛋白免疫新西兰大白兔制备的多克隆抗体与BmCRP有较好的特异性。W estern b lotting检测结果:BmCRP蛋白在家蚕卵、幼虫、蛹、蛾4个发育时期均有表达,蛹期表达量最高;在5龄幼虫的表皮、头部、卵巢、睾丸、马氏管中均有表达。荧光定量RT-PCR检测结果:BmCRPmRNA在家蚕卵、幼虫、蛹、蛾的整个生命周期中,其转录水平呈增加趋势;在5龄幼虫不同组织中的转录水平从高到低依次为表皮、头部、生殖腺、中肠、马氏管、气管、丝腺和脂肪体。细胞定位实验结果显示BmCRP蛋白在Bm5细胞的细胞核和细胞质中均存在,细胞核中的荧光信号比细胞质中的信号强。研究结果有助于进一步探明家蚕BmCRP蛋白的结构和功能。