家蚕BmLHep59蛋白的表达和亚细胞定位

编号 zgly0001410141

文献类型 期刊论文

文献题名 家蚕BmLHep59蛋白的表达和亚细胞定位

作者 侯振宇  张耀洲 

作者单位 浙江理工大学生命科学学院生物化学研究所 

母体文献 蚕业科学 

年卷期 2011年02期

年份 2011 

分类号 S881.24 

关键词 家蚕  肝细胞癌相关抗原-59蛋白  多克隆抗体  组织分布  亚细胞定位 

文摘内容 肝细胞癌相关抗原-59（hepatocellular carcinoma-associated antigen59,Hep59）属于哺乳动物中一类含有约100个氨基酸残基的保守结构域家族,这类蛋白主要存在于真核生物细胞中,大多为假想蛋白。从家蚕蛹cDNA文库中筛选的一个新基因,其编码蛋白含有一个和Hep59高度同源的保守结构域,将其命名为BmLHep59（GenBank登录号:DN985181）。PCR扩增该基因的ORF,经EcoRⅠ/XhoⅠ双酶切重组到原核表达载体pET-28a（+）,并转入E.coli Rosetta（DE3）感受态细胞中表达。通过镍柱亲和层析得到纯化的重组蛋白BmLHep59,并以此纯化重组蛋白作为抗原免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,经ELISA检测抗血清效价可达1∶12 000以上。用Western blotting检测到家蚕5龄幼虫的表皮、丝腺和血淋巴中均有BmLHep59表达,其中在血淋巴的表达量较高,暗示该蛋白可能参与调控家蚕的造血机能。该蛋白在蛹期中也有表达。亚细胞定位显示BmLHep59在家蚕Bm5细胞的细胞质和细胞核中均有分布。