正交设计优化南方根结线虫RAPD-PCR体系

编号 zgly0001421699

文献类型 期刊论文

文献题名 正交设计优化南方根结线虫RAPD-PCR体系

作者 吴篆芳  曹坳程  郭美霞  王秋霞  李园  颜冬冬  毛连纲  马涛涛 

作者单位 中国农业科学院植物保护研究所/农业部农药化学与应用重点实验室 

母体文献 中国植保导刊 

年卷期 2012年10期

年份 2012 

分类号 S432.45 

关键词 南方根结线虫  RAPD-PCR  正交设计  条件优化 

文摘内容 以南方根结线虫(Meloidogyne incognita)DNA为模板,对影响南方根结线虫RAPD-PCR扩增的重要参数进行了优化试验,以期建立南方根结线虫RAPD-PCR反应最佳体系。应用L16(45)正交设计研究了Taq酶、10×PCR buffer、dNTP、primer、模板DNA对扩增反应的影响。结果表明,南方根结线虫RAPD-PCR优化体系为20μL体系中含模板3μL、10μmol/L引物1.5μL、10×反应缓冲液2.5μL、2.5 mmol dNTP mixture 2.4μL、Taq DNA聚合酶0.4μL。在此基础上筛选出扩增稳定、多态性丰富的RAPD引物,并通过梯度PCR试验,确定了引物最佳退火温度。该优化RAPD-PCR反应体系具有良好的稳定性和重现性,可应用于南方根结线虫不同居群间亲缘关系和遗传多样性的分析。