转基因玉米中膦丝菌素乙酰转移酶双抗体夹心ELISA检测方法的建立

编号 zgly0001462135

文献类型 期刊论文

文献题名 转基因玉米中膦丝菌素乙酰转移酶双抗体夹心ELISA检测方法的建立

作者 刘志浩  高丽丽  王新桐  孙佳芝  杨正友  柴同杰 

作者单位 山东农业大学动物科技与动物医学院  山东农业大学生命科学学院 

母体文献 西北农林科技大学学报(自然科学版 

年卷期 2013年11期

年份 2013 

分类号 S513 

关键词 PAT蛋白  单克隆抗体  双抗体夹心ELISA  Bt176 

文摘内容 【目的】以单克隆抗体(monoclonal antibody,mAbs)为基础,建立检测膦丝菌素乙酰转移酶(the phosphinothricin acetyltransferase,PAT)的双抗体夹心ELISA方法,为转基因玉米PAT蛋白的检测提供参考。【方法】由P3301质粒扩增出膦丝菌素乙酰转移酶基因(blalaphos resistance gene)bar,并与表达载体pET28a构建重组质粒,诱导表达产生外源性PAT蛋白;以纯化后的PAT蛋白为免疫原,制备mAbs,建立双抗体夹心ELISA方法,并与PCR检测方法进行比较,确定该方法的准确性和可靠性。【结果】应用mAbs 4D5和3E8成功建立了检测PAT蛋白的双抗体夹心ELISA方法,其有效检测范围为3.125~50ng/mL。采用该夹心ELISA方法对36份已知转基因背景的玉米样品进行了检测,根据阴阳性判定值OD450>0.210,检测出含PAT蛋白的Bt176阳性样品4份,以bar基因为检测目标利用传统PCR方法也检测出相同的Bt176样品4份,2种检测方法的符合率为100%。【结论】利用建立的双抗体夹心ELISA免疫学检测方法,可以对转基因玉米中的PAT蛋白进行准确、特异、有效的检测。