中国麋鹿朊蛋白核心片段的原核克隆表达与纯化

编号 zgly0001383464

文献类型 期刊论文

文献题名 中国麋鹿朊蛋白核心片段的原核克隆表达与纯化

作者 刘玉亮  刘雨田  胡国良  郭小泉  孙成友 

作者单位 中国动物卫生与流行病学中心  江西农业大学 

母体文献 中国动物检疫 

年卷期 2010年11期

年份 2010 

分类号 S854.43  S851.34 

关键词 PrP蛋白  酶切  转化  诱导  纯化 

文摘内容 从采取的新鲜麋鹿血液中提取麋鹿基因组DNA,通过PCR的方法从麋鹿基因组中扩增麋鹿PrP蛋白核心片段的DNA,并分别在引物的5’和3’端引入EcoR I和HindⅢ两个酶切位点,下游引物将原序列TATTAC突变为TAATAA变成两个终止密码子。通过两个酶切位点将麋鹿PrP蛋白核心片段DNA连接到pET-32a(+),转化DH5α,通过酶切鉴定和PCR鉴定,筛选出阳性克隆送菌液测序,从测序结果分析阳性克隆是否符合要求。测序正确后将核心片段基因连接到pET-32a(+),阳性质粒命名为MPrP-pET-32a(+),阳性质粒转化E.coli BL21(DE3),进行诱导表达、蛋白质纯化鉴定。