森林脑炎病毒(TBEV)实时定量TaqMan PCR检测方法的建立

编号 zgly0000407696

文献类型 期刊论文

文献题名 森林脑炎病毒(TBEV)实时定量TaqMan PCR检测方法的建立

作者 胡玉洋  杨银辉  刘洪  康晓平  朱晓光  司炳银  祝庆余 

作者单位 北京军事医学科学院微生物流行病研究所 

母体文献 解放军医学杂志 

年卷期 2006,31(8)

页码 745-748

年份 2006 

分类号 R512.34 

关键词 脑炎病毒亚组  蜱传  实时定量PCR  TaqMan 

文摘内容 目的建立快速检测TBEV的实时定量TaqMan PCR方法。方法根据GenBank发表的TBEV全基因组序列资料, 在其C基因和NS5基因区段设计TBEV的特异探针和引物, 在E基因区段设计普通PCR引物。以MDJ01株作为待检毒株, 黄病毒属的另外7株病毒用来评价检测体系的特异性。测定病毒的TCID50值并制备病毒拷贝数标准品, 分别用于制作病毒滴度和拷贝数标准曲线。与常规PCR方法进行了灵敏度比较, 并建立了病毒感染小鼠的检测模型。结果该检测方法的灵敏度可达到100拷贝/反应或0.1TCID50, 是常规PCR方法的十倍。作为对照的黄热病毒疫苗株17D、登革1～4型病毒、日本脑炎病毒、西尼罗病毒Chin-01株结果均为阴性, 证明该体系具有良好的特异性。经过多批次、不同浓度样品的重复检测, 批内和批间变异系数均小于5%, 表明该体系具有较好的稳定性和重复性。结论建立了一种灵敏、特异、简便易行的TBEV的TaqMan实时定量PCR检测方法, 为TBEV的预防控制和诊断提供了一种技术手段。