Lyz-GFP双元基因在苜蓿愈伤组织中的转化

编号 zgly0001382633

文献类型 期刊论文

文献题名 Lyz-GFP双元基因在苜蓿愈伤组织中的转化

作者 韩斌  马晖玲  李云霞 

作者单位 甘肃农业大学草业学院  草业生态系统教育部重点实验室  中-美草地畜牧业可持续研究中心 

母体文献 草地学报 

年卷期 2010年03期

年份 2010 

分类号 S541.9 

关键词 苜蓿  溶菌酶Lyz基因  绿色荧光蛋白GFP基因  愈伤组织  农杆菌介导 

文摘内容 利用农杆菌介导法将溶菌酶(Lyz)与绿色荧光蛋白(GFP)基因转入甘农1号杂花苜蓿(Medicago sativaMartyn)和甘农3号紫花苜蓿(Medicago sativaL.)品种中,获得含有该双元基因的苜蓿转基因愈伤组织;采用荧光检测和PCR扩增技术,检测到溶菌酶Lyz和绿色荧光蛋白GFP基因在苜蓿愈伤细胞中的表达;研究该双元基因在苜蓿品种甘农1号和甘农3号中转化的若干影响因素,确定适宜的转化条件以期提高基因转化效率。结果表明:75 mg.L-1的卡那霉素对苜蓿愈伤组织的生长具有显著抑制效应;300 mg.L-1头孢霉素能够有效地抑制农杆菌LBA4404的生长;OD600值为0.4~0.5的农杆菌适宜的侵染时间是10 min;经预培养3~4 d的材料侵染后再共培养3 d之后,在愈伤组织诱导培养基MS+2,4-D 2.0 mg.L-1+KT 0.5 mg.L-1+0.6%琼脂+2.5%蔗糖的培养基上诱导出抗性愈伤组织;甘农1号和甘农3号的抗性愈伤组织诱导率分别为35%和32%。