油松谷胱苷肽转移酶Tau1单体结构稳定性研究

编号 zgly0001695949

文献类型 期刊论文

文献题名 油松谷胱苷肽转移酶Tau1单体结构稳定性研究

作者 王晓霞  杨海灵  毛建丰  王晓茹 

作者单位 北京林业大学生物科学与技术学院 

母体文献 林业科学研究 

年卷期 2020年02期

年份 2020 

分类号 S791.254 

关键词 酶学测定  谷胱苷肽转移酶  结构稳定性  油松  定点突变 

文摘内容 [目的]探究油松PtGSTU1结构与功能的关系,探讨油松PtGSTU1蛋白的单体稳定性。[方法]利用同源建模模拟PtGSTU1的三维结构,推测其N末端18位精氨酸(Arg18)和C末端103位天冬氨酸(Asp103)能够形成氢键来稳定蛋白单体结构。利用定点突变,分别将Arg18和Asp103突变为具有不同极性和构象的氨基酸残基,检测其蛋白的催化活性及结构稳定性。[结果]6个Arg18突变体均无法获得高纯度的具有正确折叠的可溶蛋白,而Asp103突变体可以表达为可溶蛋白,Asp103突变体对不同底物的催化活性和亲和力明显低于野生型,对经典底物CDNB和GSH反应的催化速率(Vmax)降低了至少9倍,对底物的催化效率(kcat/Km)也明显降低。[结论]Arg18和Asp103之间形成的氢键对稳定PtGSTU1单体结构具有重要作用,由于植物GST蛋白N端的保守性和C端结构域的多变性,Arg18的突变对结构和活性的影响大于Asp103,同时预示着C端结构域中可能存在其他氨基酸位点能够与18位精氨酸形成氢键,从而稳定蛋白单体折叠结构。