奶牛乳样和粪样中幽门螺杆菌PCR检测方法的建立及初步应用

编号 zgly0001569326

文献类型 期刊论文

文献题名 奶牛乳样和粪样中幽门螺杆菌PCR检测方法的建立及初步应用

作者 张于  王寒  文月玲  江涛  沈留红  余树民  曹随忠  姚学萍 

作者单位 四川农业大学动物医学院动物疫病与人类健康四川省重点实验室 

母体文献 西北农林科技大学学报(自然科学版 

年卷期 2017年01期

年份 2017 

分类号 S852.6 

关键词 奶牛  幽门螺杆菌  PCR检测  16S rRNA基因  尿素酶A基因  磷酸葡萄糖胺变位酶基因 

文摘内容 【目的】建立一种特异、灵敏的牛源幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)检测方法,为家畜感染幽门螺杆菌的流行病学调查鉴定提供支持。【方法】分别选取Hp的16SrRNA、UreA、glmM为靶基因设计特异性引物,以H.pylori动物模型适应菌株SS1株为标准菌株建立PCR检测方法,并进行PCR条件优化,运用所建立的最优PCR方法检测临床奶牛乳样和粪样中Hp的分布情况。【结果】PCR特异性试验结果显示,仅Hp SS1株能扩增出特异性条带,而对照菌株金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、单核细胞增生李斯特氏菌、大肠杆菌及蜡样芽孢杆菌均无扩增条带。PCR灵敏度试验结果显示,16SrRNA、UreA、glmM基因在乳样中的最低检出浓度分别为101,103和103CFU/mL,在粪样中的最低检出浓度分别为101,104和104 CFU/mL。应用该PCR方法对采集自规模化养殖场及散养的共计41头奶牛的乳样和粪样进行检测,成功检出Hp DNA,靶基因16SrRNA、UreA和glmM序列与NCBI上所发表的J166和ATCC43504菌株序列的同源性均达98%以上。【结论】成功建立了特异、灵敏的牛源Hp的PCR检测方法,可以应用于临床奶牛乳样和粪样中Hp的检测。