黄粉虫抗菌肽TmAMP3在大肠杆菌中的高效表达及活性检测

编号 zgly0001399351

文献类型 期刊论文

文献题名 黄粉虫抗菌肽TmAMP3在大肠杆菌中的高效表达及活性检测

作者 唐馨  毛新芳  热西力·克来木  刘忠渊 

作者单位 新疆大学生命科学与技术学院新疆生物资源基因工程重点实验室 

母体文献 昆虫学报 

年卷期 2011年10期

年份 2011 

分类号 Q78 

关键词 黄粉虫  抗菌肽  高效表达  蛋白纯化  抗菌活性 

文摘内容 昆虫抗菌肽具有广谱抗菌活性,克隆黄粉虫Tenebrio molitor抗菌肽基因,进行原核表达和活性检测,为昆虫抗菌肽推广应用奠定一定基础。根据GenBank公布的黄粉虫抗菌肽序列设计特异引物,以RT-PCR法从黄粉虫体内克隆了抗菌肽基因TmAMP3,将其亚克隆至pET-30a表达载体中,转化到大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3)中进行原核表达,SDS-PAGE检测融合蛋白的表达,同时检测生物活性。结果表明我们成功构建了重组质粒pET-30a-TmAMP3,大部分目的蛋白呈可溶性分泌表达。经Ni2+亲和层析,获得较纯融合蛋白HIS-TmAMP3,诱导表达的融合蛋白使BL21转化菌生长受到一定程度的抑制。融合蛋白在100℃煮沸10h、与pH2～12的缓冲液混匀后,依然保持稳定的抗菌活性,具有较强的稳定性。同时检测了融合蛋白对5种菌株的最小抑菌浓度(minimun inhibitory concentration,MIC)。本研究为具有稳定活性抗菌肽进行大规模生产发酵提供了理论基础。