限制性内切酶在PCR缓冲液中酶切活性的研究(英文)

编号 zgly0001291095

文献类型 期刊论文

文献题名 限制性内切酶在PCR缓冲液中酶切活性的研究(英文)

作者 刘学东  郑冬  周燕娜  毛巍巍  马建章 

作者单位 东北林业大学野生动物资源学院  东北林业大学生命科学学院  东北林业大学野生动物资源学院 哈尔滨 150040  哈尔滨 150040  哈尔滨  150040 

母体文献 Journal of Forestry Research 

年卷期 2005年01期

年份 2005 

分类号 Q55 

关键词 限制性内切酶  酶切  PCR缓冲液 

文摘内容 选取6 种常用的限制性内切酶(Acc I、Ban II、EcoR I、Hind III、Sac I、Sca I)用于检测其直接在PCR 缓冲液中完全酶切DNA 的活性。结果表明:在PCR 缓冲液中,需要加入MgCl2作为激活因子的前提条件下,除了EcoR I 表现出星状活性外,其他酶均能完全酶切无甲基化λDNA,其结果与在酶生产厂商推荐的反应缓冲液中进行的酶切反应结果一致;在完成PCR 扩增的PCR 缓冲液中,所有酶(包括RcoR I)均能功能正常地对PCR 产物完全酶切,表明可在PCR 扩增完毕后的反应体系中直接加入限制性内切酶进行酶切反应,无需对PCR 产物进行预先纯化;镁离子浓度在2.5 mmol·L-1至10 mmol·L-1范围内对PCR 缓冲液中的限制性内切酶的活性无显著影响。上述方法可用于限制性片段长度多态(RFLP)以及单链构像多态(SSCP)研究中,但能否用于分子克隆有待进一步实验。图3 表1 参7。