改进原位循环灌流法分离小鼠肝细胞研究

编号 zgly0001411807

文献类型 期刊论文

文献题名 改进原位循环灌流法分离小鼠肝细胞研究

作者 潘君风  姜颖  贺福初  段敏  郭蔼光 

作者单位 西北农林科技大学生命科学学院  北京蛋白质组研究中心蛋白质组学国家重点实验室  军事医学科学院放射医学研究所 

母体文献 西北农林科技大学学报(自然科学版 

年卷期 2011年11期

年份 2011 

分类号 S865.13  Q813 

关键词 小鼠肝脏  原位循环灌流  肝细胞  蛋白质表达谱 

文摘内容 【目的】建立小鼠肝细胞分离原位循环灌流方法,为肝脏细胞蛋白质组研究提供技术技持。【方法】参考Seglen胶原酶两步原位灌流法,对其进行改进,建立原位循环灌流分离小鼠肝细胞方法,对小鼠肝脏进行原位循环灌流,离体消化肝脏组织,差速离心获得纯化小鼠肝细胞;台盼蓝拒染试验检测肝细胞活性,常规血球计数法计算肝细胞得率;利用显微形态观察、HE、PAS及免疫细胞化学等检测方法鉴定所获得的肝细胞纯度;用含体积分数20%FBS的RPMI-1640细胞营养液对原代小鼠肝细胞进行培养。【结果】建立了原位循环灌流分离小鼠肝细胞的方法,采用该方法可从每只小鼠肝脏中成功分选到细胞活性大于90%、纯度在95%以上的(4.2×107)～(6.5×107)个肝细胞。原代分离的小鼠肝细胞培养4h后,大多数细胞可贴壁,12h后贴壁完全,细胞呈伸张状态,该原代肝细胞可持续培养7d以上,且细胞形态状况良好。【结论】成功建立了小鼠肝脏原位循环灌流试验体系,获得了纯度和活性均较高的小鼠肝细胞,分选所得的小鼠肝细胞完全满足构建肝细胞蛋白质组表达谱试验的需要。