活体转染离体分离分选法制备基因修饰原代肝细胞的研究

编号 zgly0000448076

文献类型 期刊论文

文献题名 活体转染离体分离分选法制备基因修饰原代肝细胞的研究

作者 夏荣  廖允军  王成友  伍建春  唐远志  申群喜  叶秋华 

作者单位 深圳市第二人民医院普外科 

母体文献 中国基层医药 

年卷期 2006,13(4)

页码 623-625

年份 2006 

分类号 R657.3  R735.7 

关键词 肝再生  肝细胞  门静脉  转染  荧光抗体技术  模型  动物 

文摘内容 目的 探索一种高效获取基因修饰原代肝细胞的新方法。方法Wistar大鼠70%切肝建立肝再生模型, 术后24h肝隔离门静脉注射脂质体-质粒DNA复合物(1ipofectamine-pEGFP-N1 DNA complexes, lipoplex)转绿色荧光蛋白(green fluorescent protein, GFP)基因至肝细胞, 对照组注射生理盐水(NS)。转染后15d(分为两组, 每组5只: 切肝并于门静脉注射lipoplex组(L组); 切肝并于门静脉注射NS组(N组), 均以胶原酶消化、Percoll液梯度离心法获取纯化肝细胞悬液; 以NS组为对照并以GFP为荧光标记物, 用流式细胞仪(flowcytometry, FCM)分析实验组肝细胞的转染率。结果FCM分析L组的平均转染率为(3.40±2.09)%.结论肝再生模型Lipoplex门静脉途径灌注转染, 可获得稳定的GFP表达率。活体转染离体分离分选法获取基因修饰原代肝细胞是一种高效, 可行的新方法。