shRNA对大鼠心肌细胞牛磺酸转运体的抑制作用

编号 zgly0001458715

文献类型 期刊论文

文献题名 shRNA对大鼠心肌细胞牛磺酸转运体的抑制作用

作者 杨群辉  杨建成  刘梅  吴高峰  冯颖  胡建民 

作者单位 沈阳农业大学畜牧兽医学院 

母体文献 动物营养学报 

年卷期 2013年11期

年份 2013 

分类号 S865.12 

关键词 H9c2细胞  RNA干扰  牛磺酸转运体  细胞增殖 

文摘内容 本试验旨在研究短发夹RNA(shRNA)对大鼠心肌细胞牛磺酸转运体(TauT)的抑制作用。根据已克隆的大鼠心肌TauT基因序列设计并构建了3个shRNAs(shRNA1#、shRNA2#、shRNA3#)及1个阴性对照shRNA表达载体,利用脂质体LipofectamineTM2000将构建好的重组质粒shRNA1#、shRNA2#、shRNA3#及阴性对照质粒分别转染H9c2细胞,细胞分为对照组(未转染组)、shRNA-Neg组(阴性对照组)和3个转染组(shRNA1#组、shRNA2#组、shRNA3#组),每组3个重复。应用四唑盐(MTT)法检测H9c2细胞增殖情况,实时荧光定量PCR检测TauT mRNA表达水平。结果表明,与阴性对照组和未转染组比较,shRNA1#质粒仅在转染细胞后的24 h极显著降低了TauT mRNA表达水平(P<0.01),shRNA2#质粒在转染细胞后的24、48、72 h均极显著降低了TauT mRNA表达水平(P<0.01),shRNA3#质粒则是在转染细胞后的72 h极显著降低了TauT mRNA表达水平(P<0.01);MTT检测结果表明,转染TauT shRNA1#、shRNA2#、shRNA3#入H9c2细胞24、48、72 h后,细胞增殖均未受到显著影响(P>0.05)。上述结果提示,shRNA2#重组质粒能有效抑制TauT基因的表达,且短期内未影响H9c2细胞增殖,为研究TauT基因及揭示牛磺酸在心肌细胞代谢中的作用奠定基础。