应用Bac to Bac系统表达NDV长春株HN蛋白基因

编号 zgly0001236420

文献类型 期刊论文

文献题名 应用Bac to Bac系统表达NDV长春株HN蛋白基因

作者 丁壮  金宁一  王兴龙  金扩世  王宏伟  米志强  殷震 

作者单位 解放军军需大学军事兽医研究所!长春130062  解放军军需大学? 

母体文献 动物医学进展 

年卷期 2001年02期

年份 2001 

分类号 Q78 

关键词 新城疫病毒  HN基因  BaotoBac系统  表达 

文摘内容 将质粒 p KSHNC利用 Bam HI和Xba I双酶切后回收。将转座载体 p Fast Bac I同样方法酶切、回收。将回收的 HNC与 p FastBac I连接 ,使目的基因亚克隆到 p Fast Bac I上的 ocu基因启动子下游的 MCS上 ,然后转化 E.coli DH5 α,以 LB/AMP+ GM平板筛选阳性重组子 ,经酶切鉴定 ,再转化至 E.coliDH1 0 Bac感受态细胞中 ,经抗性培养和蓝白斑筛选 ,挑取白色菌落为阳性重组表达载体 ,经酶切鉴定后 ,命名为 Bacmid HNC。经小量提取后 ,转染 sf- 9细胞 ,2 7℃培养 72 h,应用SDS- PAGE和 Western- blot检测和鉴定表达的 HN蛋白。结果表明 ,本研究成功地构建了 Bacmid HN重组表达载体 ,并在 sf- 9昆虫细胞中表达了 NDV长春株 HN基因 ,SDS-PAGE出现一条特异性泳带 ,约 74k Da,Western- blot结果出现一条杂交带 ,分子量与之相同 ,进一步证明构建的重组表达载体表达了 NDV长春株 HN基因