家蚕核型多角体病毒orf61基因缺失对病毒复制和各时期基因转录的影响

编号 zgly0001563545

文献类型 期刊论文

文献题名 家蚕核型多角体病毒orf61基因缺失对病毒复制和各时期基因转录的影响

作者 薛圣杰  李俊  余海鹏  张媛媛  胡冬冰  全滟平  于威 

作者单位 浙江理工大学生命科学学院  浙江省家蚕生物反应器和生物医药重点实验室 

母体文献 蚕业科学 

年卷期 2017年06期

年份 2017 

分类号 S884.51 

关键词 家蚕核型多角体病毒  orf61基因  病毒复制  基因转录调控  多角体蛋白基因启动子 

文摘内容 orf61是杆状病毒晚期表达的核心基因之一。为了研究家蚕核型多角体病毒(Bm NPV)orf61基因的功能,利用Red重组技术与Bac-to-Bac系统分别敲除和异位补回orf61基因,构建了orf61缺失型病毒orf61-ko-Bacmid以及补回型病毒orf61-reBacmid,然后分别转染家蚕培养细胞Bm N,调查orf61基因缺失对Bm NPV复制和不同时期基因转录的影响。检测orf61基因缺失型病毒转染Bm N细胞液上清中的病毒滴度为0,说明orf61基因缺失导致病毒不能形成有感染活性的芽生型病毒粒子(BV);荧光定量PCR分析orf61基因缺失会显著地降低病毒基因组的复制水平,进而导致病毒各个时期基因转录水平极显著下降(P<0.01)。此外,通过体外EMSA试验和构建双荧光素酶报告基因系统,检测ORF61蛋白对多角体蛋白基因polh启动子的调控作用,结果显示该蛋白质是polh基因转录的负调节因子。研究结果有助于深入阐释Bm NPV orf61基因在病毒基因组复制中的作用以及对极晚期表达的多角体蛋白基因polh的转录调控作用。