毛竹EMF2类基因原核表达条件优化

编号 zgly0001433946

文献类型 期刊论文

文献题名 毛竹EMF2类基因原核表达条件优化

作者 齐飞艳  陈媛文  张颖  张春玲  高健 

作者单位 国际竹藤中心  国家林业局竹藤科学与技术重点实验室 

母体文献 分子植物育种 

年卷期 2012年04期

年份 2012 

分类号 S795.7 

关键词 毛竹(Phyllostachys edulis)  EMF2  正交设计  原核表达  诱导蛋白 

文摘内容 在对毛竹EMF2基因功能研究的过程中,需要制备其抗体用于蛋白表达的检测。由于PheEMF2原核表达量低,纯化到的蛋白量不利于抗体制备,所以本研究用正交设计的方法对PheEMF2原核表达诱导条件进行优化,提高其原核蛋白表达量。根据L25(56)正交设计表设计诱导时间、诱导温度、IPTG终浓度、菌液OD值四因素五水平的融合蛋白表达诱导条件。用凝胶图像光密度分析系统分析各诱导条件下融合蛋白的表达量,发现菌液OD值和诱导温度对蛋白表达量有显著影响,而IPTG终浓度和诱导时间对蛋白表达量影响不显著。根据正交设计的效应曲线和方差分析结果,选择在菌株生长值OD600为1.1时,加入IPTG至终浓度1.0mmol/L,放入25℃摇床中振荡8 h诱导融合蛋白表达,融合蛋白的表达量约提升了10倍,占细菌总蛋白量的21.4%。